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中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品中苯并(a)芘的測(cè)定方法 GB 5009.27-85
Method for determination of benzo(a)pyrene in foods
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本標(biāo)曄視糜詬髦質(zhì)稱分斜講(a)芘的測(cè)定。
第―法 熒光分光光度法
1 原理
樣品先用有機(jī)溶劑提取，或經(jīng)皂化后提取，再將提取液經(jīng)液―液分配或色譜柱凈化，
然后在乙?；癁V紙上分離苯并(a)芘, 因苯并(a)芘在紫外光照射下呈藍(lán)紫色熒光斑點(diǎn)，將
分離后有苯并(a)芘的濾紙部分剪下，用溶劑浸出后，用熒光分光光度計(jì)測(cè)熒光強(qiáng)度與標(biāo)
準(zhǔn)比較定量。
2 試劑
2.1 苯：重蒸餾。
2.2 環(huán)己烷(或石油酸，沸程: 30～60℃)：重蒸餾或經(jīng)氧化鋁柱處理無熒光。
2.3 二甲基甲酰胺或二甲基亞砜。
2.4 無水乙醇：重蒸餾。
2.5 95％乙醇。
2.6 無水硫酸鈉。
2.7 氫氧化鉀。
2.8 丙酮：重蒸餾。
2.9 展開劑：95％乙醇-二氯甲烷(2:1)。
2.10 硅鎂型吸附劑: 將60～100目篩孔的硅鎂吸附劑經(jīng)水洗四次(每次用水量為吸附劑質(zhì)
量的4倍)于垂融漏斗上抽濾干后，再以等量的甲醇洗(<醇與吸附劑量克數(shù)相等)，抽濾干
后，吸附劑鋪于干凈瓷盤上，在130℃干燥5h后，裝瓶貯存于干燥器內(nèi)，臨用前加5％水減
活，混勻并平衡4h以上，最好放置過夜。
2.11 層析用氧化鋁(中性)：120℃活化4h。
2.12 乙?；癁V紙：將中速層析用濾紙裁成30×4cm的條狀，逐條<入盛有乙?；旌弦?BR>(180ml苯、130ml乙酸酐、0.1ml硫酸)的500ml燒杯中，使濾紙條充分地接觸溶液,保持溶
液溫度在21℃以上，時(shí)時(shí)攪拌，反應(yīng)6h，再放置過夜。取出濾紙條，在通風(fēng)櫥內(nèi)吹干，再
放入無水乙醇中浸泡4h，取出后放在墊有濾紙的干凈白瓷盤上，在室溫內(nèi)風(fēng)干壓平備用。
一次可處理濾紙15～18條。
2.13 苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取10.0mg苯并(a)芘，用苯溶解后移入100ml棕色容量
瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于苯并(a)芘100μg。放置冰箱中保存。
2.14 苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1ml苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10ml容量瓶中，用苯稀釋
至刻度，同樣反復(fù)用苯稀釋，最后配成每毫升相當(dāng)于1.0及0.1μg苯并(a)芘兩種標(biāo)準(zhǔn)使用
液，放置冰箱中保存。
3 儀器
3.1 脂肪提取器。
3.2 層析柱：內(nèi)徑10mm，長(zhǎng)350mm，上端有內(nèi)徑25mm、長(zhǎng)80～100mm漏斗,下端具有活塞。
3.3 層析缸()。
3.4 K-D全玻璃濃縮器。
3.5 紫外光燈：帶有波長(zhǎng)為365nm或254nm的濾光片。
3.6 回流皂化裝置：錐形瓶磨口處連接冷凝管。
3.7 組織搗碎機(jī)。
3.8 熒光分光光度計(jì)。
4 操作方法
4.1 樣品提取
4.1.1 糧食或水分少的食品：稱取40～60g粉碎過篩的樣品，裝入濾紙筒內(nèi)，用70ml環(huán)己
烷潤(rùn)濕樣品，接收瓶?jī)?nèi)裝6～8g氫氧化鉀、100ml95％乙醇及60～80ml環(huán)己烷，然后將脂肪
提取器接好，于90℃水浴上回流提取6～8h，將皂化液趁熱倒入500ml分液漏斗中，并將濾
紙筒中的環(huán)己烷也從支管中倒入分液漏斗，用50ml95％乙醇分復(fù)蝸唇郵掌浚將洗液合并
于分液漏斗。加入100ml水，振搖提取3min，靜置分層(約需20min)，下層液放入第二分液
漏斗，再用70ml環(huán)己烷振搖提取一次，待分層后棄去下層液，將環(huán)己烷層合并于第一分液
漏斗中，并用6～8ml環(huán)己烷淋洗第二分液漏斗，洗液合并。
用水傅雍喜⒑蟮幕芳和樘崛∫喝次, 每次100ml，三次水洗液合并于原來的第二分
液漏斗中，用環(huán)己烷提取二次，每次30ml，振搖0.5min，分層后棄去水層液，收集環(huán)己烷
液并入第一分液漏斗中，于50～60℃水浴上，減壓濃縮至40ml，加適量無水硫酸鈉脫水。
4.1.2 植物油:稱取2025g的混勻油樣,用100ml環(huán)己烷分次洗入250ml分液漏斗中,以環(huán)己
烷飽和過的二甲基甲酰胺提取三次，每次40ml，振搖1min，合并二甲基甲酰胺提取液，用
40ml經(jīng)二甲基甲酰胺飽和過的環(huán)己烷提取一次，棄去環(huán)己烷液層。二甲基甲酰胺提取液合
并于預(yù)先裝有240m12％硫酸鈉溶液的500ml分液漏斗中，混勻, 靜置數(shù)分鐘后，用環(huán)己烷
提取二次，每次100ml，振搖3min，環(huán)己烷提取液合并于第一個(gè)500ml分液漏斗。也可用二
甲基亞砜代替二甲基甲酰胺。
用40～50℃溫水洗滌環(huán)己烷提取液二次，每次100ml，振搖0.5min，分層后棄去水層
液，收集環(huán)和椴悖于50～60℃水浴上減壓濃縮至40ml。加適量無水硫酸鈉脫水。
4.1.3 魚、肉及其制品：稱取50～60g切碎混勻的樣品，再用無水硫酸鈉攪拌(樣品與無
水硫酸鈉的比例為1:1或1:2，如水分過多則需在60℃左右先將樣品烘干)，裝入濾紙筒內(nèi),
然后將脂肪提取器接好，加入100ml環(huán)己烷于90℃水浴上，回流提取6～8h，然后將提取液
倒入250ml分液漏斗中，再用6～8ml環(huán)己烷淋洗濾紙筒，洗液合并于250ml分液漏斗中,以下
按4.1.2自“以環(huán)己烷飽和過的二甲基甲酰胺提取三次”起依法操作。
4.1.4 蔬菜：稱取100g洗凈、晾干的可食部分的蔬菜，切碎放入組織搗碎機(jī)內(nèi)，加150ml
丙酮,搗碎2min。在小漏斗上加少許脫脂棉過濾,濾液移入500ml分液漏斗中,殘?jiān)?0ml丙
酮分?jǐn)?shù)次洗滌,洗液與濾液合并,加100ml水和100ml環(huán)己烷,振搖提取2min,靜置分層,環(huán)己
烷層轉(zhuǎn)入另一500ml分液漏斗中，水層再用100ml環(huán)己烷分二次提取，環(huán)己盤崛∫漢喜⒂
第一個(gè)分液漏斗中，再用250ml水，分二次振搖、洗滌，收集環(huán)己烷于50～60℃水浴上減壓
濃縮至25ml, 加適量無水硫酸鈉脫水。
4.1.5 飲料(如含二氧化碳先在溫水浴上加溫除去)：吸取50～100ml樣品于500ml分液漏
斗中,加2g氯化鈉溶解，加50ml環(huán)己烷振搖1min，靜置分層，水層分于第二個(gè)分液漏斗中，
再用50ml環(huán)己烷提取一次，合并環(huán)己烷提取液，每次用100ml水振搖、洗滌二次,收集環(huán)己
烷于50～60℃水浴上減壓濃縮至25ml，加適量無水硫酸鈉脫水。
4.1.6 糕點(diǎn)類：稱取50～60g磨碎樣品,裝于濾紙筒內(nèi)，以下按4.1.1自“用70ml環(huán)己烷潤(rùn)
濕樣品”起依法操作。
在4.1.1、4.1.3～4.1.6各項(xiàng)操作中，均可用石油醚代替環(huán)己烷，但需將石油醚提取
液蒸發(fā)至近干，殘?jiān)?5ml環(huán)己烷溶解。
4.2 凈化
4.2.1 于層析柱下端填入少許玻璃棉，先裝入5～6cm的氧化鋁，輕輕敲管壁使氧化鋁層
填實(shí)、m空隙，頂面平齊，再同樣裝入5～6cm的硅鎂型吸附劑，上面再裝入5～6cm無水硫
酸鈉，用30ml環(huán)己烷淋洗裝好的層析柱，待環(huán)己烷液面流下至無水硫酸鈉層時(shí)關(guān)閉活塞。
4.2.2 將樣品環(huán)己烷提取液倒入層析柱中,打開活塞,調(diào)節(jié)流速為每分鐘1ml,必要時(shí)可用
適當(dāng)方法加壓，待環(huán)己烷液面下降至無水硫酸鈉層時(shí),用30ml苯洗脫,此時(shí)應(yīng)在紫外光燈下
觀察,以藍(lán)紫色熒光物質(zhì)完全從氧化鋁層洗下為止,如30ml苯不足時(shí),可適當(dāng)增加苯量。收
集苯液于50～60℃水浴上減壓濃縮至0.1～0.5ml(可根據(jù)樣品中苯并(a)芘含量而定，應(yīng)注
意不可蒸干)。
4.3 分離
4.3.1 在乙?；癁V紙條上的一端5cm處，用鉛筆劃一橫線為起始線，吸取一定量?jī)艋蟮?BR>濃縮液，點(diǎn)于濾紙條上，用電吹風(fēng)從紙條背面吹冷風(fēng)，使溶劑揮散，同時(shí)點(diǎn)20μl苯并(a)
芘的標(biāo)準(zhǔn)使用液(1μg/ml)，點(diǎn)樣時(shí)斑點(diǎn)的直徑不超過3mm，層析缸(筒)內(nèi)盛有展開劑，濾
紙條下B浸入展開劑約1cm，待溶劑前沿至約20cm時(shí)取出陰干。
4.3.2 在365或254nm紫外光燈下觀察展開后的濾紙條用鉛筆劃出標(biāo)準(zhǔn)苯并(a)芘及與其同
一位置的樣品的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，剪下此斑點(diǎn)分別放入小比色管中，各加4ml苯加蓋，插入50～
60℃水浴中不時(shí)振搖，浸泡15min。
4.4 測(cè)定
4.4.1 將樣品及標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的苯浸出液移入熒光分光光度計(jì)的石英杯中，以365nm為激發(fā)光
波長(zhǎng), 以365～460nm波長(zhǎng)進(jìn)行熒光掃描，所得熒光光譜與標(biāo)準(zhǔn)苯并(a)芘的熒光光譜比較
定性。
4.4.2 與樣品分析的同時(shí)做試劑空白, 包括處理樣品所用的全部試劑同樣操作，分 讀
取樣品、標(biāo)準(zhǔn)及試劑空白于波長(zhǎng)406、406＋5、406-5nm處的熒光強(qiáng)度，按基線法由式(1)
計(jì)算所得的數(shù)值，為定量計(jì)算的熒光強(qiáng)度。
F = F406 - (F401 + F411)/2................(1)
4.5 計(jì)算
S1/F × (F1-F2) × 1000
X1 = ─────────────── .............(2)
m × V2/V1
式中：X1――樣品中苯并(a)芘的含量，μg／kg;
S1―─苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的含量，μg;
F―─標(biāo)準(zhǔn)的斑點(diǎn)浸出液熒光強(qiáng)度；
F1―─樣品斑點(diǎn)浸出液熒光強(qiáng)度；
F2―─試劑空白浸出液熒光強(qiáng)度；
V1―─樣品濃縮液體積，ml;
V2―─點(diǎn)樣體積，ml;
m――樣品質(zhì)量，g。
第二法 目測(cè)比色法
5 原理
樣品經(jīng)提取、凈化后于乙酰化濾紙上層析分離苯并(a)芘,分離出的苯并(a)芘斑點(diǎn)，
在波長(zhǎng)365nm的紫外燈光下觀察，與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)>行目測(cè)比色概略定量。
6 試劑
同2.1～2.14。
7 儀器
同3.1～3.7。
8 操作方法
8.1 樣品提取：按4.1.1～4.1.6的方法操作。
8.2 凈化：按4.2.1～4.2.2的方法操作。
8.3 測(cè)定
8.3.1 吸取5、10、15、20或50 μl樣品濃縮液(可根據(jù)>品中苯并(a)芘含量而定)10、
20μl及苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.1μg/ml)，點(diǎn)于同一條乙?；癁V紙上。按4.3.1展開，
取出陰干。
8.3.2 于暗室紫外燈下目測(cè)比較，找出相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)熒光強(qiáng)度的樣品濃縮液體積，如
樣品含量太高，可稀釋后再重點(diǎn)，盡量使樣品濃度在兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)之間。
8.4 計(jì)算
S2×1000
X2 = ───────..........................(3)
m×V2/V1
式中：X2――樣品中苯并(a)芘的含量，μg/kg;
S2――樣品斑點(diǎn)相當(dāng)苯并(a)芘的含量，μg；
V1――樣品濃縮總體積，ml;
V2――點(diǎn)樣體積，ml;
m―─樣品質(zhì)量，g。
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附加說明：
本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會(huì)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分委員會(huì)提出，由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)
督檢驗(yàn)所歸口?！?BR> 本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省衛(wèi)生防疫站、江蘇省衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草。
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中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部1985-05-16發(fā)布 1985-12-01實(shí)施
標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)
食品中苯并(a)芘的測(cè)定方法 GB
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